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BCA 法蛋白含量測定試劑盒說明書(分光光度法)

貨號：LE-1-371

正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定確保蛋白濃度在 20-2000μg/ml 內(nèi)。

測定意義

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

測定原理

堿性條件下，蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將 Cu2+還原成 Cu+； 2 分子的 BCA 與 Cu+結(jié)合，生成紫色絡(luò)合物，在 40-595nm 有吸收峰，562nm 處吸收峰最強。

自備儀器和用品

臺式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計、移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制

試劑 A：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑 B：液體 1mL×1 支，4℃保存。

標準蛋白：0.5mg/ml液體×1 支，4℃保存。

工作液配制：臨用前請根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×1mL），將試劑 A 和 B 按照 50：1 的比例混合，蓋緊后充分混勻。

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取

1、液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。

2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水）冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）

3、細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

測定操作

1、分光光度計預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 562nm，蒸餾水調(diào)零。

2、工作液置于 60℃水浴預(yù)熱 30min。

注意：空白管和標準管只需要做一次。

計算公式

Cpr (mg/mL)= C 標準品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）

=0.5×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）

注意事項

1、BCA 法蛋白含量測定試劑盒，適用于測定蛋白濃度在 20-2000μg/ml 樣品。測定前取 1-2 個樣做預(yù)實驗，樣品蛋白含量太高的話，請稀釋至相應(yīng)濃度范圍內(nèi)，以確保測定的準確性。

2、待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、蒸餾水或 PBS 提??；

3、由于受測定溫度及時間等的影響，建議嚴格按照給定條件測定，即 60℃水浴保溫 30min。