主要用途
組織琥珀酸-細(xì)胞色素C還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用底物琥珀酸， 通過反應(yīng)系統(tǒng)測(cè)定樣品中細(xì)胞色素C還原后峰值的增高，即采用比色法測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種組織（動(dòng)物、人體等）裂解懸液樣品中琥珀酸-細(xì)胞色素C還原酶的特異性活性檢測(cè)。可用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，反應(yīng)優(yōu)化，檢測(cè)敏感。
技術(shù)背景
琥珀酸-細(xì)胞色素C還原酶（succinate cytochrome C reductase）是線粒體呼吸鏈的超級(jí)復(fù)合物（super complex），由線粒體呼吸鏈復(fù)合物II，通常稱為琥珀酸－輔酶Q還原酶或琥珀酸脫氫酶（SQR；Succinate-Coenzyme Q Reductase；Succinate Dehydrogenase），和線粒體呼吸鏈復(fù)合物III，通常稱為輔酶Q－細(xì)胞色素C還原酶、細(xì)胞色素還原酶或bc1復(fù)合物（QCR；ubiquinol cytochrome c oxidoreductase；cytochrome reductase；bc1 complex）等構(gòu)成，調(diào)節(jié)電子由琥珀酸轉(zhuǎn)移到細(xì)胞色素C上。其中SQR是線粒體電子傳遞鏈與三羧酸循環(huán)鏈接的載體：含有四個(gè)亞單位，包括共價(jià)結(jié)合的輔基黃素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide；FAD）和三個(gè)鐵硫中心（Fe-S clusters），以及細(xì)胞色素b560亞單位；QCR是線粒體電子傳遞鏈的中心元素：含有十一個(gè)亞單位，包括細(xì)胞色素bL（b566）、bH（b562），細(xì)胞色素c1（cytochrome c1）和Rieske鐵硫蛋白（Rieske iron-sulfur protein；RISP）。該復(fù)合物異常會(huì)導(dǎo)致嗜鉻細(xì)胞瘤（paraganglioma）、腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤（pheochromocytoma）、Leigh綜合征，以及心肌疾病?；阽晁岬孜?，通過琥珀酸-細(xì)胞色素C還原酶的催化，氧化為富馬酸，同時(shí)氧化型細(xì)胞色素C，轉(zhuǎn)化為還原型細(xì)胞色素C，在分光光度儀下產(chǎn)生吸光峰值的變化（550nm 波長），由此定量測(cè)定琥珀酸-細(xì)胞色素C還原酶的特異活性。其反應(yīng)系統(tǒng)是：
產(chǎn)品內(nèi)容
GENMED清理液（Reagent A） 毫升
GENMED裂解液（Reagent B） 毫升
GENMED緩沖液（Reagent C） 毫升
GENMED反應(yīng)液（Reagent D） 毫升
GENMED陰性液（Reagent E） 毫升
GENMED底物液（Reagent F） 微升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存GENMED清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融；GENMED底物液（Reagent F），避免光照，有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于反應(yīng)液和樣品制備的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器
（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
比色皿：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng)物
實(shí)驗(yàn)步驟
一、 樣品準(zhǔn)備
1． 手術(shù)取出動(dòng)物組織，并秤重以確定組織重量
2． （選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
3． （選擇步驟）加入適量的（500毫克組織需要3毫升）GENMED清理液（Reagent A）清洗1次
4． 移入到一個(gè)液氮凍存管
5． 即刻放進(jìn)液氮罐過夜
6． 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：切莫使組織凍融）
7． 放進(jìn)一個(gè)15毫升錐形離心管
8． 加入預(yù)冷的xx微升GENMED裂解液（Reagent B）
9． 轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管
10． 強(qiáng)力渦旋震蕩30秒，充分混勻
11． 置于冰槽里孵育30分鐘，期間每10分鐘強(qiáng)力渦旋震蕩30秒（注意：如需暫時(shí)停止，放進(jìn)－70℃冰箱里儲(chǔ)存?zhèn)溆?/i>）
12． 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
13． 小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管
14． 移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)（注意：建議使用GENMED Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－GMS30030.1）
15． 即刻放進(jìn)－70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
一、 測(cè)定準(zhǔn)備
1． 準(zhǔn)備好待測(cè)樣品（例如組織裂解樣品等），置于冰槽里
2． 設(shè)定好分光光度儀（溫度為30℃）：波長為550nm，間隔60秒，讀數(shù)6次（共5分鐘），并置零
3． 實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化；GENMED緩沖液（Reagent C）室溫預(yù)熱；GENMED底物液（Reagent F）注意避光。然后進(jìn)行下列操作。
二、 背景對(duì)照測(cè)定
1． 移取xx微升GENMED緩沖液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升GENMED反應(yīng)液（Reagent D）
3． 加入xx微升GENMED底物液（Reagent F）
4． 上下傾倒數(shù)次，混勻
5． 放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱里靜置3分鐘
6． 加入xx微升GENMED陰性液（Reagent E）
7． 上下傾倒數(shù)次，混勻（限定在3秒之內(nèi)）
8． 即刻放入分光光度儀檢測(cè)，此為背景空對(duì)照：550波長讀數(shù)0分鐘－550波長讀數(shù)1分鐘或5分鐘
三、 樣品活性測(cè)定
1． 移取xx微升GENMED緩沖液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升GENMED反應(yīng)液（Reagent D）
3． 加入xx微升GENMED底物液（Reagent F）
4． 上下傾倒數(shù)次，混勻
5． 放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱里靜置3分鐘
6． 加入100微升待測(cè)樣品（注意：50微克總蛋白）
7． 上下傾倒數(shù)次，混勻（限定在3秒之內(nèi)）
8． 即刻放入分光光度儀檢測(cè)，此為樣品活性讀數(shù)：550波長讀數(shù)0分鐘－550波長讀數(shù)1分鐘或5分鐘
四、 計(jì)算樣品活性
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為21次操作，包括背景對(duì)照
2． 操作時(shí)，須戴手套
3． GENMED緩沖液（Reagent C）含有毒性物質(zhì)，避免直接用手接觸
4． 系統(tǒng)操作過程中，背景測(cè)定只需1次
5． 加入樣品啟動(dòng)反應(yīng)后3秒內(nèi)即刻比色測(cè)定
6． 測(cè)定值由低到高變化；測(cè)定可以持續(xù)5分鐘
7． 1分鐘或5分鐘測(cè)定讀數(shù)高于0分鐘測(cè)定讀數(shù)，表明有酶活性
8． 比色測(cè)定后，比色皿須清洗徹底
9． 建議待測(cè)樣本線粒體蛋白濃度為50微克/100微升；如果樣本酶活性過低或過高，則可以增加或降低樣本量；注意計(jì)算公式的調(diào)整（本公司提供GENMED Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒GMS30030.1）
10． 琥珀酸-細(xì)胞色素C還原酶單位活性定義為：在30℃，pH 7.5條件下，每分鐘內(nèi)能夠還原1微摩爾細(xì)胞色素C所需的酶量作為一個(gè)活性單位
11． 本公司提供系列線粒體及其酶類技術(shù)產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)準(zhǔn)確
使用承諾
秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請(qǐng)立即以書面形式（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
訂購信息
單組份訂購信息
編號(hào) 名稱 規(guī)格
GMS50687.2 GENMED組織琥珀酸-細(xì)胞色素C還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次
GMS50687.2A GENMED清理液（Reagent A） 毫升
GMS50687.2B GENMED裂解液（Reagent B） 毫升
GMS50687.2C GENMED緩沖液（Reagent C） 毫升
GMS50687.2D GENMED反應(yīng)液（Reagent D） 毫升
GMS50687.2E GENMED陰性液（Reagent E） 毫升
GMS50687.2F GENMED底物液（Reagent F） 毫升
GMS30030.1 GENMED Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒 100次
試劑盒訂購信息
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產(chǎn)品編號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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GMS50687.1 |
細(xì)胞琥珀酸-細(xì)胞色素C還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
20次 |
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GMS50687.2 |
組織琥珀酸-細(xì)胞色素C還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
20次 |
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GMS50687.3 |
純化線粒體琥珀酸-細(xì)胞色素C還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
20次 |
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GMS50877.1 |
細(xì)胞NADH-細(xì)胞色素C還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
20次 |
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GMS50877.2 |
組織NADH-細(xì)胞色素C還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
20次 |
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GMS50877.3 |
純化線粒體NADH-細(xì)胞色素C還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
20次 |
0551-66107970
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