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貨號(hào)：LE-1-208

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義

PAL（EC4. 3  1 5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類(lèi)代謝的  關(guān)鍵酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類(lèi)植保素、黃酮類(lèi)色素等合成密切相關(guān)， 在植物正常生長(zhǎng)發(fā)育和抵御病菌侵害過(guò)程中起重要作用。

測(cè)定原理

PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 處有最大吸收值，通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率計(jì)算 PAL 活性。

所需的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、 1 mL 石英比色皿、研缽、冰 和蒸餾水。

試劑的組成和配制

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×3 瓶，4℃保存。臨用前每瓶加入 4mL 蒸餾水水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；

試劑三：液體 2.5mL×1 瓶 ，4℃保存。

粗酶液提取

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1： 5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）， 進(jìn)行冰浴勻漿。 10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

混勻，靜置 10min 后，290nm 處記錄測(cè)定管吸光值 A1 和對(duì)照管吸光值 A2 ， △A=A1-A2。 注意：對(duì)照管只要做一管

PAL 活性計(jì)算

1、按蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應(yīng)體系中每 min 使 290nm 下吸光值變化 0.1 為一個(gè)酶活性單位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V 反總÷（Cpr× V 樣）÷0.1÷T

= 17.3×ΔA÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每 g 組織每 mL 反應(yīng)體系中每 min 使 290nm 下吸光值變化 0.1為一個(gè)酶活性單位。 

PAL（U/g 鮮重）=ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.1÷T

= 17.3×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積， 1.04mL； V 樣：加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液 體積， 1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；