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貨號：LE-1-097

正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：12mL× 1 瓶，4℃保存。

試劑二：無水乙醇， 自備。

試劑三：濃硫酸， 自備。

標準品：粉劑 10mg×1 支，4℃避光保存。

產(chǎn)品說明：

多糖是生物體中廣泛存在的物質(zhì)，是一類由醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接而成的天然高分子多聚 物，它是生物體內(nèi)重要的生物大分子，是維持生命活動正常運轉(zhuǎn)的基本物質(zhì)之一。

利用水提醇沉法提取總多糖，苯酚-硫酸法測定總多糖含量。

自備儀器和用品：

分析天平、分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、比色皿、無水乙醇、濃硫酸、蒸餾水、水浴鍋。

操作步驟：

一、總多糖提取

樣本烘干粉碎，稱取約 0.05g 樣本，加入 1mL 水，充分勻漿。100℃水浴提取 2h（必須蓋緊 蓋子防止水分流失），冷卻后 10000g 離心 10min ，取上清。吸取 0.2mL 上清，慢慢加入 0.8mL 無 水乙醇，混勻后 4℃靜置過夜，10000g 離心 10min ，棄上清，沉淀中加入 1mL  水，充分混勻溶解 沉淀。

二、測定步驟

1、 分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 490nm。

2、 稱 1mg 標準 品用 1mL 蒸餾水溶解 ，濃度為 1mg/mL 。取適 當溶液配制濃度為 1mg/mL 、 0.5mg/mL 、0.25mg/mL 、0. 125mg/mL 、0.0625mg/mL 的標準品（蒸餾水進行稀釋）。取 1.5mL EP 管 吸取 200μL 標準品，加入 100μL 試劑一和 0.5mL 濃硫酸，混勻后 90℃水浴 20min ，流水冷卻。取 750μL 加入比色皿，于 490nm 下測定吸光值A 。根據(jù)吸光度（x ）和濃度（y ，mg/mL） 做出標準曲線。

3、 吸取 200μL 上清，加入 100μL 試劑一和 0.5mL 濃硫酸，混勻后 90℃水浴 20min ，流水冷卻。 取 750μL 加入比色皿，于 490nm 下測定吸光值 △A。

三、總多糖含量計算

根據(jù)標準曲線，將樣品△A 帶入公式中（x ），計算出樣品濃度 y（mg/mL）。 

1、按樣本鮮重計算

總多糖（mg /g 干重）=5y÷W

V 樣總：上清液總體積，mL；V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；W：樣品質(zhì)量，g  ；樣本體積已被稀釋五倍，T。