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土壤脫氫酶活性檢測試劑盒說明書（微量法）

測定意義：

土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內活性微生物量以及其對有機物的降解活性，可以作為土壤微生物的降解性能指標。

測定原理：

氫受體 2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC）在細胞呼吸過程中接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），TF 呈現(xiàn)紅色，在波長485nm處有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm測定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性。

自備實驗儀器及用品：

篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、冰、蒸餾水、丙酮（不允許快遞，請用戶自備）。

試劑的組成和配制：

試劑一：粉劑×1 瓶，使用前加 5mL 水溶解，4℃避光保存（盡量現(xiàn)配現(xiàn)用）。

試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：丙酮，自備。

樣品處理：

1. 土壤樣品： 準確稱取過40目篩的新鮮土壤樣品約0.1g（以保證TTC與土壤顆粒充分接觸）。

2. 污泥樣品：污泥用蒸餾水洗滌，10000g，25℃，離心10min，棄上清，反復3-4次。

測定步驟和操作表：

1、分光光度計/酶標儀預熱 0min，調節(jié)波長至485nm。

2、操作表

脫氫酶活力計算：

酶活單位定義：

在 37℃時，每克樣品每小時使反應體系 OD 值每增加0.01為一個酶活單位。

計算公式：脫氫酶活性（U/g）=A 485 ÷0.01÷T÷W= 16.67×A 485 ÷W

T：培養(yǎng)時間，h；W：樣品質量，g

注意事項：

1. 配制好的試劑一避光保存于 4℃，最好在一周內使用，若出現(xiàn)紅色，則不能使用。

2. 試劑三易揮發(fā)，有毒，為了您的健康，請穿實驗服，戴口罩，戴乳膠手套操作。

3. 反應完成后立即冰浴以終止反應，并去除干凈殘留的反應液。

4. 如果測定出來的吸光值較大，減少樣品用量再進行測定。

5. 試劑盒 2-8℃保存。