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多功能氧化酶（MFO）試劑盒說明書(分光光度法)

貨號：LE-1-182

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

多功能氧化酶又稱混合功能氧化酶，可產(chǎn)生降解反應(yīng)，可使原化學(xué)物質(zhì)變?yōu)榈投镜幕驘o毒的物質(zhì)從體內(nèi)排出；還可產(chǎn)生激活反應(yīng)，可使原化學(xué)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為具有親電子性質(zhì)，導(dǎo)致毒性增強(qiáng)，成為致突變物或終致癌物。近年來對混合功能氧化酶系與外源性化學(xué)物質(zhì)相互作用的深入研究，對于從分子生物學(xué)水平上進(jìn)一步了解外源性化學(xué)物質(zhì)的毒作用具有重要意義。

測定原理：

MFO 催化對硝基苯甲醚產(chǎn)生對硝基苯酚，在 400nm 下有特征吸光值。

自備用品：

分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水、氯仿。

試劑組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存;

試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃避光保存;

試劑二：粉劑×3 管，-20℃保存；臨用前取一管加入 2mL 水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑三：液體 30mL×1 瓶，4℃保存;

試劑四：液體 80mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：提取液（mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心 20min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 400nm，蒸餾水調(diào)零。

2、在 10mL 管中依次加入如下試劑

分別加入 2.5mL 氯仿，充分混勻萃取，靜置 10min，取下層氯仿層 1.5mL 至新的管中。再加入試劑四 1.5mL，充分混勻萃取，取上層水相 1mL 于 1mL 玻璃比色皿中，400nm 下測定吸光值A(chǔ) 測定與A 空白，△A=A 測定-A 空白?？瞻坠苤恍铚y一管。

MFO 活性計(jì)算:

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0238x + 0.0021，R² = 0.9997；y，吸光度；x,標(biāo)準(zhǔn)品濃度，單位 nmol/mL。

1、按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每g 樣本每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

MFO（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0021）÷0.0238×V 總÷(V 樣÷V 樣總×W )÷T

=4.2×（△A-0.0021）÷W

2、按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

MFO（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0021）÷0.0238×V 總÷(V 樣×Cpr)÷T

=4.2×（△A-0.0021）÷Cpr

V 總：最終萃取液體積，1.5 mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，500μL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。