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總黃酮醇含量測(cè)試盒說(shuō)明書(微量法)

黃酮醇廣泛存在于各種植物中，具有很強(qiáng)的抗氧化和清除自由基能力，國(guó)內(nèi)外已對(duì)其生理功能或藥理做了大量研究。

測(cè)定原理：

在中性或弱堿性及亞硝酸鈉存在條件下,黃酮醇與鋁鹽生成螯合物,加入氫氧化鈉溶液后顯紅橙色，在 510nm 處有最大吸光值。

需自備的儀器和用品：

酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96 孔酶標(biāo)板、研缽、冰、蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 60 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 2 mL×1 管，4℃保存；

試劑三：液體 2 mL×1 管，4℃保存；

試劑四：液體 12 mL×1 瓶，4℃保存。

黃酮醇的提?。?/span>

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一），進(jìn)行勻漿，超聲提取 30min，8000g，25℃離心 10min，取上清待測(cè)。

2、血清（漿）等液體樣品：直接測(cè)定。

測(cè)定步驟：

1、酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 510nm。

2、樣本測(cè)定

按下表在EP 管中加入如下試劑

每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

黃酮醇含量計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 1.5272x - 0.01     R² = 0.9994；   x 為蘆丁含量（mg/mL），y 為吸光值差值△A。

按照血清（漿）體積計(jì)算

黃酮醇含量（mg/mL）= (△A+0.01)÷1.5272=0.65×(△A+0.01)

按照樣品質(zhì)量計(jì)算

黃酮醇含量（mg/g 鮮重）= [ (△A+0.01)÷1.5272×V1]÷(W ×V1÷V2）= 0.65×(△A+0.01)÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1 mL；V2：加入提取液體積，1 mL； W：樣本質(zhì)量，g；