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貨號：LE-1-206

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

賴氨酸是人體必需氨基酸之一，能促進人體發(fā)育、增強免疫功能，并有提高中樞神經(jīng)組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為第一限制性氨基酸。

測定原理：

蛋白質(zhì)中的賴氨酸具有一個游離的 ε-NH2，它與茚三酮試劑反應(yīng)生成藍紫色物質(zhì)，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與賴氨酸的含量成線性關(guān)系。亮氨酸與賴氨酸的碳原子數(shù)目相同，而且僅有—個游離氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制標準液。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 12.5mL 試劑三充分溶解混勻；

試劑二：液體 12.5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：60%乙醇，自備。

賴氨酸提?。?/span>

樣本烘干粉碎，稱取約 0.01g 樣本，加入 1mL 提取液，充分勻漿。80℃水浴提取 20min，冷卻后 10000g 離心 10min取上清待測。

測定步驟

1、分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 530nm，蒸餾水調(diào)零。

2、工作液的配制：取 10mL 試劑一與 10mL 試劑二混合搖勻，取上清備用。用不完的試劑4℃保存。

3、在有蓋 EP 管中加入下列試劑：

混勻，80℃水浴 30min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至常溫。

賴氨酸含量計算：

標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0062x - 0.0212；x 為亮氨酸含量（μg/mL ），y 為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

賴氨酸含量(μg/ mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.00 62×V1] ÷( Cpr ×V1)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr

2、按照樣本質(zhì)量計算

賴氨酸含量(μg/g 干重)=[(△A +0.0212)÷0 .0062×V1] ÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.2mL；V2：加入提取液體積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；1.1515，校正系數(shù)。