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二氫黃酮醇還原酶（DFR）試劑盒說明書(分光光度法)

貨號：LE-1-187

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

二氫黃酮醇還原酶是類黃酮合成途徑中的一個關(guān)鍵酶，在決定植物的花色 、葉色 、果色和其他經(jīng)濟器 官的色澤及其營養(yǎng)品質(zhì)方面起著重要作用。

測定原理：

二氫黃酮醇還原酶作用于二氫槲皮素產(chǎn)生兒茶素，可與香草醛縮合形成紅色化合物，在 500nm 處有特 征吸收峰。

試劑組成和配制

提取液：液體 50 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 30 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑 ×1 瓶，4℃保存。臨用前加 5ml 蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑四：液體 40 mL×2 瓶，4℃避光保存。

自備儀器和用品：

研缽 、低溫離心機 、震蕩儀 、氮吹儀 、可見分光光度計 、 1ml 玻璃比色皿 、水浴鍋 、無水乙醇 、 乙酸 乙酯。

酶液提?。?/span>

1、組織：按照組織質(zhì)量（ g） ：提取液體積(ml)為 1 ：5~ 10 的比例（建議稱取約 0. 1g 組織，加入 1ml 提取 液） ，進行冰浴勻漿 。 10000g  ，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、液體：直接檢測。

測定操作表

酶活性計算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0184x+0.0002，R²=0.999

1、按照蛋白濃度計算

酶活性定義 ：在 30℃, pH7.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生 1mmol 兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。

DFR 活性（mmol/min/mg prot）= (△A-0.0002）÷0.0184×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T÷2 

= 9.06×(△A-0.0002）÷Cpr

2、按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義 ：在 30℃, pH7.5 條件下，每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生 1mmol 兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。

DFR 活性（mmol/min/g  鮮重）= (△A-0.0002）÷0.0184×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T÷2

= 9.06×(△A-0.0002）÷W

3、按液體體積計算

酶活性定義 ：在 30℃, pH7.5 條件下，每毫升液體每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生 1mmol 兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。

DFR 活性（mmol/min/ml）= (△A-0.0002）÷0.0184×V 反總÷V 樣÷T÷2 

= 9.06×(△A-0.0002）

V 反總：反應(yīng)總體積， 1ml；V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0. 1ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr： 樣本蛋白濃度，mg/ml；W ，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，30min