產(chǎn)品名稱:小鼠酪氨酸激酶B(TrkB)ELISA試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號:LE-B1346
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本試劑盒僅限于科研使用,請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。
嚴格按照實驗說明書操作,并佩戴一次性手套和口罩。
以下文字為產(chǎn)品簡介,詳情以說明書為準,可QQ或聯(lián)系在線客服索取。
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檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被抗體的微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集及處理方式
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑盒規(guī)格及配置
名稱 |
96孔配置 |
48孔配置 |
微孔酶標板 |
12孔×8條 |
12孔×4條 |
標準品 |
0.3mL*6管 |
0.3mL*6管 |
樣本稀釋液 |
6mL |
3mL |
檢測抗體-HRP |
10mL |
5mL |
20×洗滌緩沖液 |
25mL |
15mL |
底物A |
6mL |
3mL |
底物B |
6mL |
3mL |
終止液 |
6mL |
3mL |
封板膜 |
2張 |
2張 |
說明書 |
1份 |
1份 |
自封袋 |
1個 |
1個 |
自備儀器
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用
洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果計算
繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應(yīng)OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
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