產(chǎn)品名稱：多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)測試盒
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣,100管/48樣
產(chǎn)品貨號：LE-1-330,LE-2-330
產(chǎn)品報價：
免費咨詢：0551-66107970
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
檢測方法 |
規(guī)格 |
售價（元） |
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LE-1-330 |
多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)測試盒 |
紫外分光光度法 |
50管/24樣 |
520 |
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LE-2-330 |
多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)測試盒 |
微量法 |
100管/48樣 |
1100 |
多聚半乳糖醛酸反式消除酶（PGTE）試劑盒說明書（紫外分光光度法）
測定意義：
植物細胞壁是對抗病原真菌侵入的屏障，病原菌侵染植物過程中會分泌一系列細胞壁降解 酶， 多聚半乳糖醛酸反式消除酶是一種細胞壁降解酶，在病原菌致病過程中具有重要作用。
測定原理：
PGTE 催化多聚半乳糖醛酸反應釋放出不飽和醛酸，不飽和醛酸在 232nm 有特征吸光值，通 過測定 232nm 下吸光值增加速率反映酶活性。
需自備的儀器和用品：
分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、 1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體 60mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑一：液體 40mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：液體 6mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑三：粉劑× 1 瓶， 4℃保存； 使用前加入 4mL 試劑一，60℃加熱震蕩溶解， 用不完的試 劑 4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
1、 細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內， 離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量 （104 個）： 提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液） ，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 12000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、 組織： 按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 提取液）， 進行冰浴勻漿。 12000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 232nm ，蒸餾水調零。
2、樣本測定
（1）工作液的配制：臨用前按照樣本數(shù)量，按以下比例配制工作液
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試劑名稱(μL） |
測定工作液 |
對照工作液 |
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試劑一 |
800 |
800 |
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試劑二 |
200 |
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蒸餾水 |
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200 |
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試劑三 |
50 |
50 |
（2）按下表在 1mL 石英比色皿中加入如下試劑
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試劑名稱(μL） |
測定管 |
對照管 |
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樣本 |
100 |
100 |
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測定工作液 |
900 |
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對照工作液 |
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900 |
30℃避光孵育 30min ，232nm 下測定吸光值 A 測定與 A 對照，△A=A 測定-A 對照。每個測定管需設一個對照管。
PGTE 活性計算：
1、按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘釋放 1 nmol 的不飽和醛酸定義為一個酶活力單位。
PGTE（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷ (ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr)÷T= 72.5 ×△A÷Cpr
2、按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘釋放 1 nmol 的不飽和醛酸定義為一個酶活力單位。
PGTE（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷ (ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總）÷T= 72.5 ×△A ÷W
3、按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘釋放 1 nmol 的不飽和醛酸定義為一個酶活力單位。
PGTE（nmol/min/104 cell）= [ΔA×V 反總÷ (ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)×1000÷T =0.145 ×△A
V 反總： 反應體系總體積， 1×10-3 L；ε ：不飽和醛酸摩爾消光系數(shù)， 4.6×103 L / mol /cm；d： 比色皿光徑， 1cm；V 樣：加入樣本體積，0.1 mL；V 樣總：加入提取液體積， 1 mL；T： 反應時間， 30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度， mg/mL；W：樣本質量， g；500：細菌或細胞 總數(shù)， 500 萬。
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