產(chǎn)品名稱：果膠甲基反式消除酶(PMTE)測(cè)試盒
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣,100管/48樣
產(chǎn)品貨號(hào)：LE-1-329,LE-2-329
產(chǎn)品報(bào)價(jià)：
免費(fèi)咨詢：0551-66107970
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
檢測(cè)方法 |
規(guī)格 |
售價(jià)（元） |
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LE-1-329 |
果膠甲基反式消除酶(PMTE)測(cè)試盒 |
分光光度法 |
50管/24樣 |
520 |
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LE-2-329 |
果膠甲基反式消除酶(PMTE)測(cè)試盒 |
微量法 |
100管/48樣 |
1100 |
果膠甲基反式消除酶（PMTE）試劑盒說明書（分光光度法）
貨號(hào)：LE-1-329
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
植物細(xì)胞壁是對(duì)抗病原真菌侵入的屏障，病原菌侵染植物過程中會(huì)分泌一系列細(xì)胞壁降解 酶，果膠甲基反式消除酶是一種細(xì)胞壁降解酶，在病原菌致病過程中具有重要作用。
測(cè)定原理：
PMTE 催化果膠反應(yīng)釋放出不飽和醛酸，不飽和醛酸在 232nm 有特征吸光值，通過測(cè)定 232nm 下吸光值增加速率反映酶活性。
需自備的儀器和用品：
分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、 1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體 60mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑一：液體 40mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：液體 6mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑三：粉劑× 1 瓶， 4℃保存； 使用前加入 4mL 試劑一，60℃加熱震蕩溶解， 用不完的試 劑 4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
1、 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)， 離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量 （104 個(gè)）： 提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液） ，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、 組織： 按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 提取液）， 進(jìn)行冰浴勻漿。 12000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)
測(cè)定步驟：
1 、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 232nm ，蒸餾水調(diào)零。
2 、 樣本測(cè)定
（1）工作液的配制：臨用前按照樣本數(shù)量，按以下比例配制工作液
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試劑名稱(μL） |
測(cè)定工作液 |
對(duì)照工作液 |
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試劑一 |
800 |
800 |
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試劑二 |
200 |
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蒸餾水 |
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200 |
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試劑三 |
50 |
50 |
（2）按下表在 1mL 石英比色皿中加入如下試劑
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試劑名稱(μL） |
測(cè)定管 |
對(duì)照管 |
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樣本 |
100 |
100 |
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測(cè)定工作液 |
900 |
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對(duì)照工作液 |
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900 |
30℃避光孵育 30min ，232nm 下測(cè)定吸光值 A 測(cè)定與 A 對(duì)照，△A=A 測(cè)定-A 對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
PMTE 活性計(jì)算：
1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘釋放 1 nmol 的不飽和醛酸定義為一個(gè)酶活力單位。
PMTE（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷ (ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr)÷T=72.5 ×△A÷Cp
2、按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘釋放 1 nmol 的不飽和醛酸定義為一個(gè)酶活力單位。
PMTE（nmol/min/g 鮮重） =[ΔA×V 反總÷ (ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總）÷T= 72.5 ×△A ÷W
3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘釋放 1 nmol 的不飽和醛酸定義為一個(gè)酶活力單位。
PMTE（nmol/min/104 cell）= [ΔA×V 反總÷ (ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)×1000÷T = 0.145×△A
V 反總： 反應(yīng)體系總體積， 1×10-3 L；ε ：不飽和醛酸摩爾消光系數(shù)， 4.6×103 L / mol /cm；d： 比色皿光徑， 1cm；V 樣：加入樣本體積，0.1 mL；V 樣總：加入提取液體積， 1 mL；T： 反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度， mg/mL；W：樣本質(zhì)量， g；500：細(xì)菌或細(xì)胞 總數(shù)， 500 萬。
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