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貨號(hào)：LE-1-294

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義

線粒體是半自主性細(xì)胞器，不僅是細(xì)胞內(nèi)氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要場(chǎng)所， 為細(xì)胞的活動(dòng)提供能量，而且在許多生命活動(dòng)中具有重要調(diào)控作用。因此，準(zhǔn)確和全面分離  保持正?；钚缘木€粒體已經(jīng)成為許多研究的前提。

測(cè)定原理

利用專門試劑溫和勻漿組織和細(xì)胞，再采用差速離心法從勻漿中分離完整線粒體；利用專門 試劑，配合超聲波破碎線粒體，可以得到保持活性的線粒體酶。

需自備的儀器和用品

超聲波破碎儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一： 50mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑二： 10mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑三： 10mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑四： 1mL×1 支，-20℃保存； 

提取步驟

1、準(zhǔn)確稱取約 0.1g 組織或收集約 500 萬細(xì)胞，加入 1mL 試劑一和 10uL  試劑四 ，用冰浴 勻漿器或研缽研磨。

2、 4℃ 600 g 離心 5min。

3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g 離心 10min。

4、上清液即胞漿提取物，可用于研究線粒體蛋白向胞漿的釋放。

5、沉淀為完整線粒體。含有完整的內(nèi)膜和外膜，并具有線粒體的生理功能?？捎糜诰€粒體 的生理功能等方面的研究。

6、 在沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑四 ，超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W， 超聲 3 秒， 間隔 10 秒，重復(fù) 30 次）， 可用于線粒體酶活性測(cè)定。

7、 在沉淀中加入 200uL 試劑三和 2uL 試劑四 ，超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W， 超聲 3 秒， 間隔 10 秒，重復(fù) 30 次），可用于線粒體蛋白濃度測(cè)定。

注意事項(xiàng)

1、分離線粒體和提取線粒體蛋白質(zhì)的所有步驟均需在冰上或4℃進(jìn)行，所用溶液需冰浴或4℃預(yù)冷。

2、通常在分離線粒體時(shí)前后兩次離心速度選取 600g 和 11,000g，如果希望純度更高，但對(duì) 線粒體的得率要求不高，前后兩次離心速度可以采用 1000g 和 3500g。

3、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。