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貨號(hào)：LE-1-392

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

高鐵還原酶（ferric-chelate  reductase,FCR）催化高價(jià)鐵螯合物中的  Fe³⁺ 還原為  Fe²⁺ ，在部分物種鐵元素的吸收中有重要作用。

測(cè)定原理：

FCR 催化  Fe³⁺ 還原為  Fe²⁺ ， Fe²⁺ 和 ferrozine 反應(yīng)顯色，在 562nm 下有特征吸光值。

自備用品：

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存;

試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存;

試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：水 mL)為 1 ：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 蒸餾水）， 進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min ，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 562nm ，蒸餾水調(diào)零。

2、工作液配制：將試劑一、二、三以 1:1:1 的比例混合。臨用前配制，用多少配多少。

3、在 1mL 玻璃比色皿中，加入 250μL 樣本上清和750μL 工作液，混勻，記錄初始吸光值 A1 和 30min 后的吸光值 A2 。ΔA=A2-A1。FCR 活性計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 8.0014x + 0.0011 ，R² = 0.9997；

1、按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每 g 樣本每分鐘產(chǎn)生 1nmol  Fe²⁺ -ferrozine 定義為一個(gè)酶活力單位。

FCR（nmol/min/g  鮮重）= (△A-0.0011）÷8.0014×1000×V 標(biāo)÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T = 4.166×(△A-0.0011）÷W

2、按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每 mg 蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol  Fe²⁺ -ferrozine 定義為一個(gè)酶活力單位。

FCR（nmol/min/mg prot）= (△A-0.0011）÷8.0014×1000×V 標(biāo)÷(V 樣÷V 樣總×Cpr)÷T =4.166×(△A-0.0011）÷Cpr

V 樣總：加入提取液體積，1 mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，250μL；V 標(biāo)：加入標(biāo)準(zhǔn)品體積 ， 250μL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；1000，μmol  到 nmol 的轉(zhuǎn)換系數(shù)。