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貨號：LE-1-331

正式測定之前選擇2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。  

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。 

試劑一：粉劑 1 瓶，4℃避光保存，使用前加15mL 蒸餾水溶解。 

試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。 

工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑一和試劑二以1:1 混合。使用前37℃溫育2min。 

產(chǎn)品說明： 

CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中，能可逆地催化肌酸與ATP 之間的轉(zhuǎn)磷?；磻?yīng)，在能量運轉(zhuǎn)、肌肉收縮和ATP 再生中有重要作用，是臨床診斷心腦疾病的一個重要指標(biāo)。 CK 催化磷酸肌酸和ADP 生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP 與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖， 6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH，導(dǎo)致340nm 光吸收值增加。 

自備實驗用品及儀器： 

天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1 mL 石英比色皿和蒸餾水。 

操作步驟：

一、 粗酶液提取 

1. 組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。 

2. 血清樣本：直接測定。 

二、 測定操作表

三、 CK 活性計算公式

1、按組織蛋白含量計算

酶活定義：37℃，pH7.0 時，每毫克蛋白質(zhì)1min 內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH 為一個酶活單位。

CK 活性（nmol/min / mg prot）=△A ÷（e×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr)= 804×△A÷Cpr

2、按組織樣本質(zhì)量計算：

酶活定義：37℃，pH7.0 時，每克樣品1min 內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH 為一個酶活單位。

CK 活性（nmol/min /g）= △A ÷（e×d）×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= 804×△A÷W

3、按血清計算：

酶活定義：37℃，pH7.0 時，每升血清1min 內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH 為一個酶活單位。

CK 活性（nmol/min /L）= △A ÷（e×d）×V 反總÷V 樣×1000= 804000×△A

e：NADPH 微摩爾消光系數(shù)，6.22×10^-3 L/μmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積，1mL；V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.2mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項：

1. 配制好的工作液4℃穩(wěn)定7 天，請盡量配制后盡快使用。

2. 血清的CK 不穩(wěn)定，采集樣本后盡快測定，4℃避光保存可穩(wěn)定24h。

3. 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定，可選用BCA 蛋白含量測定試劑盒進行測定。

4. OD 值大于0.5 可用提取液適當(dāng)稀釋樣品，并在計算公式中相應(yīng)的改變稀釋倍數(shù)。