產(chǎn)品名稱:促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子受體2(CRFR2)ELISA試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào):LE-Y818
免費(fèi)咨詢:0551-66107970
本試劑盒僅限于科研使用,請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。
嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書操作,并佩戴一次性手套和口罩。
以下文字為產(chǎn)品簡(jiǎn)介,詳情以說(shuō)明書為準(zhǔn),可QQ或聯(lián)系在線客服索取。
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檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被抗體的微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
樣品收集及處理方式
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑盒規(guī)格及配置
名稱 |
96孔配置 |
48孔配置 |
微孔酶標(biāo)板 |
12孔×8條 |
12孔×4條 |
標(biāo)準(zhǔn)品 |
0.3mL*6管 |
0.3mL*6管 |
樣本稀釋液 |
6mL |
3mL |
檢測(cè)抗體-HRP |
10mL |
5mL |
20×洗滌緩沖液 |
25mL |
15mL |
底物A |
6mL |
3mL |
底物B |
6mL |
3mL |
終止液 |
6mL |
3mL |
封板膜 |
2張 |
2張 |
說(shuō)明書 |
1份 |
1份 |
自封袋 |
1個(gè) |
1個(gè) |
自備儀器
1. 酶標(biāo)儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3. 樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用
洗板機(jī)洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
結(jié)果計(jì)算
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
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