產品名稱：磷脂酶A2(PLA2)測試盒
產品規(guī)格：50管/24樣,100管/48樣
產品貨號：LE-1-151,LE-2-151
產品報價：
免費咨詢：0551-66107970
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貨號 |
產品名稱 |
檢測方法 |
規(guī)格 |
售價（元） |
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LE-1-151 |
磷脂酶A2(PLA2)測試盒 |
分光光度法 |
50管/24樣 |
3600 |
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LE-2-151 |
磷脂酶A2(PLA2)測試盒 |
微量法 |
100管/48樣 |
7000 |
磷脂酶A2測定試劑盒說明書（分光光度法）
貨號：LE-1-151
正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂 sn-2位脂?；饷?，廣泛存在于動植物組織、細菌、細胞核分泌物中，參與脂肪消化，精子成熟、細胞信號傳遞、脂質過氧化修復、宿主反應等生理過程，在控制體內磷脂類物質平衡、調節(jié)機體新陳代謝、參與疾病的病理進程等方面發(fā)揮著及其重要的作用。
測定原理
磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸膽堿（HEPC）產生游離巰基，與DTNB反應生成黃色物質，在412nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、超速冷凍離心機、研缽、可見分光光度計、1 mL 玻璃比色皿。
試劑組成和配制
提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體×5 瓶，-20℃避光保存。臨用前根據用量每瓶加入4.5mL試劑二充分混勻。(3天使用完)
樣品處理
1、組織：按照質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g 離心 5min，取全部上清于 4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于 1mL 試劑一。
2、細胞：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g 離心5min，取全部上清于4℃、100000g 離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。
3、血清：直接測定。
測定操作
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對照管 |
測定管 |
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樣品（μL） |
100 |
100 |
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試劑二（μL） |
900 |
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試劑三（μL） |
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900 |
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充分混勻，37℃反應 10min，于1mL玻璃比色皿，蒸餾水調零，測定412nm處吸光值，記為A對照管和A測定管，△A=A測定管- A對照管 |
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計算公式
1、按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解HEPC產生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（e×d）×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T= 73.53×△ A÷Cpr
2、按照樣本質量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解HEPC產生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/g）= △A÷（e×d）×V 反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T= 73.53×△A÷W
3、細胞數量計算
酶活性定義：每104個細胞每分鐘水解HEPC產生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/104cell）= △A÷（e×d）×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T= 73.53×△ A÷細胞數量
4、按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解HEPC產生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/mL）= △A÷（e×d）×V 反總÷V 樣÷T= 73.53×△A
e：TNB 消光系數，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應總體積，1mL；V 樣：反應體系中加入樣本體積，0.1mL；W：樣本質量，g；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，10min
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