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正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

Gu 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的 20 種氨基酸之一， 而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來源之一。此外， Glu 還是  味精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。

測定原理：

利用專用提取液提取，然后用顯色劑進行顯色，顯色后在 570nm 下進行測定。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、 1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶 ，4℃保存； 臨用前加入 10mL 蒸餾水，充分混勻溶解，用不完的試劑仍4℃保存。 

谷氨酸提?。?/span>

1、細菌或培養(yǎng)細胞樣品：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴ 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000： 1 的比例（建議 1000 萬細菌或細胞加入 2mL 試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重 復(fù) 30 次）； 8000g  常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1 ：5~10 的比例（建議稱取約 0.2g 組 織，加入 2mL 試劑一）， 進行冰浴勻漿。8000g  常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）或細胞培養(yǎng)液樣品： 按照血清（漿）或細胞培養(yǎng)液體積（mL）：試劑一體積 (mL)為 1： 5~10 的比例（建議取 0.2mL 血清（漿）或者細胞培養(yǎng)液加入 2mL 試劑一），進 行冰浴勻漿。8000g  常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 570nm，蒸餾水調(diào)零。

2、在有蓋 EP 管中加入下列試劑：

混勻，90℃水浴 20min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，于 570nm 波長處比色，△A=A 測定管-A 對照管。對照管只要做一管。

谷氨酸含量計算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為 y = 0.0074x- 0.5255；x 為谷氨酸含量(μg/mL），y 為吸光值。

2、按照血清（漿） 或者細胞培養(yǎng)液體積計算

谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2）= 1351×(△A+0.5255)

3、按照蛋白濃度計算

谷氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr

4、按照樣本質(zhì)量計算

谷氨酸含量(μg/g 鮮重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.2×(△A+0.5255) ÷W

5、按照細菌或細胞密度計算

谷氨酸含量(μg/10⁴ cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積， 1mL；V2：加入提取液體積，2 mL；V3：加入血清（漿） 或細胞培養(yǎng)液體積 ，0.2 mL；  Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g； 1000：細菌或細胞總數(shù)， 1000 萬。

注意：

1、該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中谷氨酸含量測定，檢測下限為 100μg/mL。

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為： 100μg/mL -600μg/mL。

3、ΔA 線性范圍為：0.01-2；若大于 2 則需要將上清液用試劑一稀釋至適當(dāng)倍數(shù)后測定，計 算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。