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1 原理及用途

黃曲霉毒素是由黃曲霉菌屬的黃曲霉和寄生曲霉等產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，主要污染玉米、花生、堅(jiān)果等。黃曲霉毒素以 AFB1、AFB2、AFG1 和 AFG2 這四種毒素為主，黃曲霉毒素總量一般是指這四種毒素的總量。它們是 I 類致癌物，被證明對(duì)人和動(dòng)物的肝臟、腎臟等組織和器官具有很大的危害，是一類毒性很強(qiáng)的致癌物質(zhì)。

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)谷物、花生、飼料等樣品中的黃曲霉毒素，試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的黃曲霉毒素和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗黃曲霉毒素抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含黃曲霉毒素含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中黃曲霉毒素的殘留量。

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度：0.02ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～15min

2.3 檢測(cè)下限：

谷物……………………………………0.1ppb

飼料……………………………………0.2ppb

2.4 交叉反應(yīng)率：

黃曲霉毒素B1…………………………100%

黃曲霉毒素B2…………………………80%

黃曲霉毒素G1…………………………75%

黃曲霉毒素G2…………………………45%

黃曲霉毒素M1…………………………8%

2.5 樣本回收率：

谷物及配合飼料……………………85%±15%

3 試劑盒組成

酶標(biāo)板……………………………96孔

標(biāo)準(zhǔn)液（黑蓋）：各1ml

0ppb、0.02ppb、0.04ppb、0.08ppb、0.16ppb、0.32ppb

高標(biāo)準(zhǔn)液：100ppb …………………1ml

酶標(biāo)記物（紅蓋） …………………5.5ml

抗體工作液（藍(lán)蓋） ………………5.5ml

底物液A（白蓋）……………………6ml

底物液B（黑蓋）……………………6ml

終止液（黃蓋）………………………6ml

20×濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

說(shuō)明書(shū)…………………………………1份

蓋板膜…………………………………1張

自封袋…………………………………1個(gè)

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器：酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：?jiǎn)蔚?0μl-200μl，100μl-1000μl、多道300μl

4.3 試劑：甲醇

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知：

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液：

配液1：樣本提取液

70%甲醇，即V甲醇:V去離子水=7：3。

配液2：工作洗滌液

將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。

5.3 樣本前處理步驟：

5.3.1 谷物處理方法 

1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加5ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去離子水，混勻；

3）取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：5    檢測(cè)下限：0.1ppb

5.3.2 配合飼料處理方法 

1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加10ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去離子水，混勻；

3）取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：10    檢測(cè)下限：0.2ppb（若樣本中黃曲霉毒素含量較高，可取2）步驟中已混勻的液體，以35%甲醇進(jìn)行稀釋，此時(shí)樣本稀釋倍數(shù)則為實(shí)際稀釋倍數(shù)。例如：取2）步驟中液體以35%甲醇10倍稀釋，實(shí)際稀釋倍數(shù)為10×10=100，檢測(cè)下限：2ppb）