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還原型谷胱甘肽試劑盒說明書(分光光度法)

貨號：LE-1-264

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

GSH 是細(xì)胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì)，在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運(yùn)輸?shù)戎芯哂兄匾?nbsp;作用 。還原型與氧化型比值（ GSH/GSSG）是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要動態(tài)指標(biāo) 。因此，測定細(xì)胞內(nèi) GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。

測定原理：

DTNB 與 GSH 反應(yīng)生成復(fù)合物，在 412nm 處有特征吸收峰；其吸光度與 GSH 含量成正比。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體 ×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 ×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 ×1 瓶，4℃避光保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計 、低溫離心機(jī) 、水浴鍋 、可調(diào)節(jié)移液器 、 1ml 玻璃比色皿和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1、組織：按照組織質(zhì)量（ g）：試劑一體積(ml)為 1：5~ 10 的比例（建議稱取約 0. 1g 組織，加入 1ml 試劑 一）進(jìn)行冰浴勻漿 。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。

2、細(xì)菌 、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（ 10⁴ 個）：試劑一體積（ml）為 500~ 1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加  入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 8000g， 4℃,   離心 10min，取上清置于冰上待測。

3、血清等液體：直接測定。

GSH 測定操作：

1、分光光度計預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 412 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、試劑二置于 25℃（一般物種）或者 37℃（哺乳動物）水浴中保溫 30min。

3、空白管：取 1ml 玻璃比色皿，依次加入 100μl 蒸餾水，700μl 試劑二，200μl 試劑三，混勻靜置 2min 后 測定 412 nm 吸光度 A1。

4、測定管：取 1ml 玻璃比色皿，依次加入 100μl 上清液，700μl 試劑二，200μl 試劑三，混勻靜置 2min 后 測定 412 nm 吸光度 A2。

注意 ：空白管只需要測定一次。

GSH 含量計算公式：

GSH 標(biāo)準(zhǔn)曲線公式：y= 1.5 x（x 為 GSH 濃度，μ mol /ml；y 為吸光值） 

GSH 計算：

1、按蛋白濃度計算

GSH ( μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷ 1.5×V 樣÷（V 樣×Cpr  ）

=0.667×(A2－A1) ÷Cpr

2、按樣本鮮重計算

GSH ( μ mol/g 鮮重）=(A2－A1) ÷ 1.5×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W)

=0.667×(A2－A1) ÷W

3、按細(xì)胞數(shù)量計算

GSH ( μ mol /10⁴ cell）=(A2－A1) ÷ 1.5×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)

=0.667×(A2－A1) ÷細(xì)胞數(shù)量

4、按液體體積計算

GSH ( μ mol/ ml）=(A2－A1) ÷ 1.5×V 樣÷V 樣  

=0.667×(A2－A1)

V 樣總：上清液總體積，1 ml；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μl=0.1 ml；W：樣品質(zhì)量，g  ；Cpr： 上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；

注意事項(xiàng)：

1、試劑一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑， 因此上清液不能用于蛋白濃度測定。

2、最低檢出限為 0.01mmol/L。