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淀粉含量檢測試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-081

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存； 

試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存； 

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×10mg支，4℃保存；臨用前加入 1mL 蒸餾水溶解，制備 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：

淀粉是植物中糖的主要儲存形式，其含量測定對于評價食品營養(yǎng)價值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。

利用 80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，進(jìn)一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖，采用蒽酮比色法測定葡萄糖含量，即可計算淀粉含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽、冰、濃硫酸（不允許快遞）、蒸餾水。

操作步驟：

一、淀粉提?。?/span>

1、稱取約 0.1g 樣品于研缽中研碎，加入 1mL 試劑一，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，80℃水浴提取30min，3000g，常溫離心 5min，棄上清，留沉淀。

2、沉淀中加入 0.5mL 雙蒸水，放入沸水浴中糊化 15min（蓋緊，以防止水分散失）。

3、冷卻后，加入 0.35mL 試劑二，常溫提取 15min，振蕩 3-5 次。

4、加入 0.85mL 雙蒸水，混勻，3000g，常溫離心 10min，取上清液。

5、取上清液 100μL 加入 700μL 蒸餾水后即進(jìn)行了八倍稀釋測定。注：若稀釋八倍后樣品吸光度大于 1.5 或小于 0.1，建議將樣品再進(jìn)行適當(dāng)稀釋或濃縮后測量。

標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)備：將10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行二倍稀釋得到 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

二、測定操作表：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 620nm，蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至 95℃。

3、工作液的配制：臨用前在試劑三中加入 13.5mL 蒸餾水后，緩慢加入 76.5mL 濃硫酸，不斷攪拌， 充分溶解，待用。

4、標(biāo)準(zhǔn)品測定：取 0.2mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液（蒸餾水做空白）和 1mL 工作液至 EP 管中，95℃水浴 10 min（蓋緊，防止水分散失），自然冷卻至室溫，在 620 nm 波長下測定吸光度值 A 標(biāo)準(zhǔn)及 A 空白。計算ΔA=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白。

5、樣本測定：取0.2mL樣本和1mL工作液至EP管中，95℃水浴10 min（蓋緊，防止水分散失），自然冷卻至室溫，在620 nm 波長下測定吸光度值A測定。ΔA′=A測定- A空白。

三、淀粉含量計算：

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：

以 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液為橫坐標(biāo)，ΔA 為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程 y=kx+b，將ΔA′代入方程得到 x（mg/mL）；

2、淀粉含量計算：

（1）按照蛋白濃度計算

淀粉含量(mg/mg prot)=x×稀釋倍數(shù)×V 提取÷（Cpr×V 提?。?8x÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

淀粉含量(mg/g 鮮重)=x×稀釋倍數(shù)×V 提取÷W=13.6x÷W

V 提?。禾崛『篌w積，1.7 mL；Cpr：樣本提取后蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；稀釋倍數(shù)：8。

注意事項(xiàng)：由于工作液具有強(qiáng)腐蝕性，請謹(jǐn)慎操作。