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正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物，而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動物而言，葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組

織等的唯一能源，而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。

測定原理：

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過氧化氫；過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在505 nm有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽和蒸餾水

試劑的組成和配制：

試劑一：0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 25ml×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 25ml×1 瓶，4℃保存；

葡萄糖提?。?/span>

1、組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g

組織，加入1mL蒸餾水），研磨成勻漿，95℃水浴10分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心 10min，取上清液備用。

2、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴

個）：蒸餾水體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL蒸餾水），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或200W，超聲3S，間隔10S，重復(fù)30次），95℃水浴10分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心10min，取上清液備用。

測定步驟 ：

1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至505nm，蒸餾水調(diào)零。

2、混合試劑的配制：使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合，用多少配多少。

3、加樣表（在EP管中加入下列試劑）：

混勻，置 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴中，保溫 15min，于 505nm 波長處讀

取吸光度?？瞻坠堋?biāo)準(zhǔn)管和測定管吸光值分別記為 A1、A2 和 A3。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要

做一管。

葡萄糖含量計算：

1、按樣本蛋白濃度計算

葡萄糖含量(μmol/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr。

2 按樣本鮮重計算

葡萄糖含量（μmol/g 鮮重）= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W

3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算

葡萄糖含量（μmol/ 10⁴cell)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)=0.001×(A3-A1)÷(A2-A1)

C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.5μmol/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1mL；

Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

注意：最低檢測限為 50nmol/g  鮮重或 0.5nmol/mg prot