產(chǎn)品名稱：乳酸脫氫酶(LDH)測試盒
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣,100管/48樣
產(chǎn)品貨號：LE-1-229,LE-2-229
產(chǎn)品報價：
免費咨詢：0551-66107970
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
檢測方法 |
規(guī)格 |
售價（元） |
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LE-1-229 |
乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 |
分光光度法 |
50管/24樣 |
180 |
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LE-2-229 |
乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 |
微量法 |
100管/48樣 |
350 |
貨號：LE-1-229
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應，伴隨著 NAD+/NADH 之間互變。
測定原理：
LDH 催化 NAD+ 氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、 1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰 和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：30mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支， -20℃保存，用時加入 10μL 試劑五和 1.3 mL 蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑三：液體 15 mL×1 瓶 ，4℃保存；
試劑四：液體 50 mL×1 瓶 ，4℃保存；
試劑五：液體 100μL×1 支 ，4℃保存；
樣品測定的準備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 1000~5000： 1 的比例（建議 2000 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1 ：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 提取液）， 進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 450nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定（在 EP 管中加入下列試劑）
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試劑名稱(μL) |
測定管 |
對照管 |
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樣本 |
50 |
50 |
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試劑一 |
250 |
250 |
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試劑二 |
50 |
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蒸餾水 |
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50 |
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試劑三 |
250 |
250 |
充分混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 15min
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試劑四 |
750 |
750 |
充分混勻，室溫靜置 15 分鐘，450 nm 下測定吸光度 ，計算 ΔA=A 測定管-A 對照管 。每個測定管需要設一個對照管。
LDH 活力單位的計算：
1、標準條件下測定的回歸曲線，y = 0.9108x+0.0037 (x 為標準品濃度 ，umol/mL；y 為 ΔA)。
2、血清（漿）LDH 活力的計算
單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（nmol/min/mL）= (ΔA-0.0037）÷0.9108÷T×103
=73.2×ΔA
3、細胞、細菌和組織中LDH 活力的計算
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（nmol/min/mg prot）=[ (ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103
=73.2×ΔA÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
（2） 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（nmol/min/g 鮮重）=[ (ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103
=73.2×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（nmol/min/104 cell）= [ (ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103
=0.037×ΔA
V1：加入反應體系中樣本體積，0.05mL；V2：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，15 min； Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細胞或細菌總數(shù)，2000 萬。
注意事項：
1、標準曲線線性范圍為：0.1 umol/mL -2 umol/mL。
2 、ΔA 線性范圍為：0.01 -2。
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