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葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒說明書(分光光度法)

貨號(hào)：LE-1-095

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物，而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動(dòng)物而言，葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的唯一能源，而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過氧化氫；過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：葡萄糖 9mg×1支，4℃保存；臨用前加入1ml蒸餾水充分溶解為50μmol/mL 葡萄糖溶液，用蒸餾水稀釋為 0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 -20℃ 保存；

試劑二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 25mL×1 瓶，4℃保存；

混合試劑的配制：使用前將試劑二和試劑三 1:1 等體積混合，用多少配多少。

操作步驟：

一、葡萄糖提?。?/span>

1、組織的處理：稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 蒸餾水研磨成勻漿，置沸水浴中煮沸 10 分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，常溫離心 10min，取上清液備用。

2、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：蒸餾水體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 蒸餾水）， 超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3S，間隔 10S，重復(fù) 30 次），置沸水浴中煮沸 10  分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心 10min，取上清液備用。

二、測(cè)定操作表：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min。波長調(diào)至 505nm，蒸餾水調(diào)零。

2、在 1.5mL 離心管中依次加入下列試劑：

混勻，置 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴中，保溫 15min，于 505nm 波長處讀取吸光度。

葡萄糖含量計(jì)算：

1、按蛋白濃度計(jì)算

葡萄糖含量（μmol/mg prot）＝C ×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)×V 樣÷（Cpr×V樣）

＝0.5×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算

葡萄糖含量（μmol/g 鮮重）＝C ×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) ×V 樣÷（W÷V樣總×V 樣）

＝0.5 ×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) ÷W

3、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

葡萄糖含量（μmol/10⁴ cell）＝C ×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) ×V 樣÷（500÷V樣總×V 樣）

＝0.001 ×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)

C：葡萄糖溶液濃度，0.5μmol/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V 樣：加入的樣本體積，100μL=0.1mL；V 樣總：樣本總體積，1mL；W：樣本鮮重，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量，500 萬。

注意：若 A 測(cè)定管大于 1.5，稀釋后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。