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尿素氮（BUN）試劑盒說明書（分光光度法） 

貨號：LE-1-307

正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

尿素是生物體內(nèi)含氮化合物分解的終產(chǎn)物，在尿酶催化下分解轉(zhuǎn)化成氨。血液尿素氮是腎功能的主要指標之一。

測定原理

樣本中尿素氮在氯化高鐵一磷酸溶液中與二乙酰一肟和硫胺脲共煮，生成一種紅色的二嗪化 合物，其顏色的深淺與尿素氮含量成正比，采用二乙酰一肟法測定尿素氮含量。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、常溫離心機、可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

試劑一：液體 6mL×1 瓶，4℃避光保存，

試劑二：液體 60mL×1 瓶，4℃避光保存。

樣品處理

1、組織：按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~ 10 的比例（建議稱取約 0. 1g，加入 1mL 蒸餾水）加入蒸餾水，勻漿后于 25℃ , 10000g 離心 10min ，取上清待測。

2、細胞：按照細胞數(shù)量（10⁴ 個）：蒸餾水體積（mL ）為 500~ 1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 蒸餾水），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w ，超聲 3 秒，間隔7 秒，總時間 3min）；然后 4℃ , 10000g 離心 10min ，取上清置于冰上待測。

3、血清或其它液體：直接檢測。

測定操作

混勻，沸水浴 10min ，冷卻后，540nm 下測定吸光值。 △A=A 測定-A 空白。空白管只要做 一管。

尿素氮含量計算：

標準條件下測定回歸方程為 y =2.048x + 0.0229 ，R² = 0.9943；x 為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

1、按照血清（漿）或者細胞培養(yǎng)液體積計算

尿素氮含量(mg/mL)= (△A-0.0229)÷2.048

=0.4882×(△A-0.0229)

2、按照樣本質(zhì)量計算

尿素氮含量 mg/g 鮮重)= (△A-0.0229)÷2.048×V 樣總÷W

=0.4882×(△A-0.0229)÷W

3、按照蛋白濃度計算

尿素氮含量(mg/mg prot)= (△A-0.0229)÷2.048÷Cpr

=0.4882×(△A-0.0229) ÷Cpr

V 樣總：加入提取液體積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500： 細菌或細胞總數(shù)，500 萬。