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果糖含量試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-283

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

果糖是一種最為常見的己酮糖，是葡萄糖的同分異構體，以游離狀態(tài)大量存在于水果的漿汁 和蜂蜜中，能與葡萄糖結合生成蔗糖。果糖是最甜的單糖，廣泛應用于食品、醫(yī)藥、保健品生產(chǎn)中。

測定原理：

果糖與間苯二酚反應，生成有色物質，在 480nm 下有特征吸收峰。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、 1mL 玻璃比色皿、研缽、蒸餾水

試劑的組成和配制：

提取液：液體  100ml×1 瓶，4℃保存；

試劑一： 1mg/mL 標準液 10mL×1 瓶 ，4℃保存；

試劑二： 液體 40ml×1 瓶，4℃保存；

試劑三： 液體  15ml×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑 0.5g×1 瓶，常溫保存。

果糖提取：

稱取 0.1~0.2g 樣本，常溫研碎；加入 1mL 提取液，適當研磨后快速轉移到有蓋離心管中；置于 80℃水浴鍋中 10min（蓋緊，以防止水分散失），振蕩 3~5 次，冷卻后，4000g，25℃ 離心 10min，取上清 ；加入少量（約 2mg）試劑四 ，80℃脫色 30min（蓋緊， 以防止水分散 失）；再加入 1mL 提取液，4000g，25℃離心 10min， 取上清液測定。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 480nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定（在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑）：

混勻，95℃水浴反應 30min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后測定 480nm處光吸收值，空白管、標準管和測定管分別記為 A1 、A2 和 A3。

果糖含量計算：

1、果糖含量（mg/mg prot）=（C 標準管×V1）×(A3－A1)÷(A2－A1) ÷（V1×Cpr）

= (A3-A1)÷（A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行測定蛋白濃度。

2、果糖含量(mg/g 鮮重）=（C 標準管×V1）×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)

= 2×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷W。

C 標準管：標準管濃度，1mg/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，2mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注意：最低檢測限為 100ng/g 鮮重或 1ng/mg prot