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脂蛋白酯酶試劑盒說明書(分光光度法)

貨號：LE-1-152

正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

脂蛋白酯酶是脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、乳腺細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成的一種酶，可催化 甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯， 以供組織氧化供能和貯存，并在不同的組織表現(xiàn)出不同的生理意 義。

測定原理

脂蛋白酯酶水解 4-硝基苯棕櫚酸酯產(chǎn)生 4-硝基苯酚，在 400nm有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、冷凍離心機(jī)、研缽、水浴鍋、可見分光光度計、1 mL 玻璃比色皿。

試劑組成和配制

試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

樣品處理

1、組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1 ：5~ 10 的比例（建議稱取約 0. 1g ，加入 1mL 試劑一）加入 試劑一，冰浴勻漿后于 4℃ , 10000g 離心 10min ，取上清待測。

2、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個）：試劑一體積（mL）為 500~ 1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w ，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 于 4℃ , 10000g 離心 10min ，取上清待測。

3、血清：直接測定。

測定操作

計算公式

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y= 0.0581x -0.0169 ，R²=0.9982

1、按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在 45℃ , pH7.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL 活性(μmol /min/mg prot）= (△A+0.0169）÷ 0.0581×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T 

= 17.21×(△A+0.0169）÷Cpr

2、按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義：在 45℃ , pH7.5 條件下，每克組織每分鐘水解產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL 活性(μmol /min /g 鮮重）=(△A+0.0169）÷ 0.0581×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T 

= 17.21×(△A+0.0169）÷W

3、按照細(xì)胞數(shù)量計算

酶活性定義：在 45℃ , pH7.5 條件下，每 10⁴ 個細(xì)胞每分鐘水解產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL 活性 (μmol /min /10⁴ cell）= (△A+0.0169）÷ 0.0581×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）÷T 

= 17.21×(△A+0.0169）÷細(xì)胞數(shù)量

4、按照液體體積計算

酶活性定義：在 45℃ , pH7.5 條件下，每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL 活性 (μmol /min /mL）=(△A+0.0169）÷ 0.0581×V 反總÷V 樣÷T

= 17.21×(△A+0.0169）

V 反總：反應(yīng)總體積，1mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0. 1mL；W：樣本質(zhì)量，g；V 樣總：加入 提取液體積，1mL；T ：反應(yīng)時間，10min

注意事項(xiàng)

1、試劑三加入混勻后靜置兩分鐘立即測定，否則影響吸光值。

2、吸光值過高或者測定結(jié)果不穩(wěn)定，則將酶液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，并在計算公式中乘以稀釋倍?shù)。