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蔗糖磷酸合成酶（SPS）試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-289

測定意義

蔗糖不僅是重要的光合產(chǎn)物，也是植物體內(nèi)運輸?shù)闹饕镔|(zhì)，還是碳水化合物的貯存形式之 一 。SPS（EC 2.4.1.14 ）以果糖-6-磷酸為受體，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成 蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系統(tǒng)看作是蔗糖合成的主要途徑。

測定原理

蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸與間苯二酚反應(yīng)可呈現(xiàn)顏色變化， 在 480nm 下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。

需自備的的儀器和用品

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、移液器、 1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 4mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑二：1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 3mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；

試劑五：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；

樣品測定的準備

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1： 5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）， 進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

混勻，25℃準確水浴 10min

沸水浴中煮沸 10min 左右（蓋緊，以防止水分散失），冷卻

混勻，沸水浴 30min，冷卻后， 480nm 下測定各管吸光值。標準管和空白管只要做一管。每個測定管需要設(shè)一個對照管。

SPS 活力單位的計算

1、按照蛋白濃度計算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg  蔗糖定義為一個酶活力單位。

SPS 活性(μg /min/mg prot)= C 標準管×V1×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白 管)÷(V1×Cpr)÷T

=100×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白管)÷Cpr

2、按照樣本鮮重計算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg  蔗糖定義為一個酶活力單位。

SPS 活性(μg/min /g 鮮重) =C 標準管×V1×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白 管)÷(W×V1÷V2)÷T

=100×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標準管-A 空白管)÷W

C 標準管：標準管濃度， 1000μg/mL；V1 ：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.03mL； V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；T ：反應(yīng)時間：10min。