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貨號：LE-1-163

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì) 、核酸、脂類等生物分子，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損，進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)代謝 紊亂引起疾病 。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一，在抗氧化類保健品和藥品研究中得 到廣泛應(yīng)用。

測定原理：

H2O2/ Fe2+  通過 Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，將鄰二氮菲- Fe2+水溶液中 Fe2+氧化為 Fe3+    ，導(dǎo)致 536nm 吸光度下降，樣品對 536nm 吸光度下降速率的抑制程度，反映了樣品清除羥自由基的能力。

試劑盒的組成：

提取液：液體 50ml × 1瓶，4℃保存

試劑一：液體 16ml× 1瓶，4℃避光保存

試劑二：液體 8ml× 1瓶，4℃避光保存

試劑三：液體 16ml× 1瓶，4℃保存

試劑四：液體 9ml× 1瓶，4℃保存

自備儀器和用品：

恒溫水浴鍋 、可見分光光度計(jì) 、 1 ml 玻璃比色皿和蒸餾水。

樣品的制備：

1、組織：按照組織質(zhì)量（g） ：提取液體積(ml)為 1 ：5~ 10 的比例（建議稱取約 0. 1g 組織，加入 1ml 提取 液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清 、果汁等液體樣品可直接測定。

3、提取物（或者藥物）可配制成一定濃度，如 5 mg/ml。

測定操作表

1 、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 536nm，蒸餾水調(diào)零。

2、工作液配制：使用之前按照每管試劑一 ：試劑二：試劑三=300:150:300  ( μl）的比例配制，用多少配多 少 ，混勻。

3、在 EP 管中加入如下試劑

注意 ：空白管和對照管只需測定一次。

計(jì)算公式

羥自由基清除率 D% =（A 測-A 對）÷（A 空-A 對）×100% 

A 空 、A 對 、A 測：空白管 、對照管和測定管的吸光值。

注意事項(xiàng)

為了比較不同樣品羥自由基清除能力，對于同一批樣品必須加入等量的樣品，血清 、組織勻漿 、果汁等液 體樣品加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。