伊人久久大香线焦|久久青青草国产第一页|亚洲国产九九九热视频|超乳视频爆乳无码免费专区|欧美日韩亚洲视频一区二区|少妇高潮惨叫喷水在线观看|亚洲区欧美区偷拍区中文字幕|国产日韩一区二区三区在线观看

還原糖含量試劑盒說明書(分光光度法)

貨號：LE-1-098

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

還原糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。植物體內(nèi)的還原糖主要包括葡萄糖、 果糖和麥芽糖等，是最常見的單糖和雙糖，其中葡萄糖和果糖不僅是呼吸作用的主要底物， 也是進(jìn)一步合成蔗糖、淀粉和纖維素的底物。

測定原理：

加熱促進(jìn)堿性溶液中 3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物，在 540nm 有 特征吸收峰；在一定的濃度范圍內(nèi)，還原糖含量與 540nm 吸光度成線性關(guān)系，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求出樣品中還原糖的量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：15mL×1 瓶 ，4℃保存； 

樣品中還原糖的提取：

1、細(xì)菌或細(xì)胞的處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量 （10⁴ 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000 ：1 的比例（建議 1000 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 2mL 試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3S，間隔 10S，重復(fù) 30 次），轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中（防止加熱時水分散失），80℃水浴中40min 并且振蕩 8~ 10 次， 8000g ，25℃離心 10min，取上清供測定用。

2 、組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1 ：5~10 的比例（建議稱取約 0.2g 組織，加入 2mL 試劑一），冰浴勻漿，轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中（防止加熱時水分散失），80℃ 水浴中 40min 并且振蕩 8~ 10 次，8000g ，25℃離心 10min ，取上清供測定用。

3、血清（漿）的處理：按照血清（漿）體積（mL）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建 議取 0.2mL 血清（漿）加入 2mL 試劑一），冰浴勻漿，轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中（防止加熱時水 分散失），80℃水浴中 40min 并且振蕩 8~ 10 次，8000g，25℃離心 10min，取上清供測定用。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2 、調(diào)節(jié)水浴鍋至 95℃。

3、在 EP 管中加入下列試劑：

將各管搖勻，在 95℃水浴中加熱 5min（蓋緊，防止水分散失），取出后立即冷卻至室溫， 混勻。在 540nm 波長下讀取對照管和測定管吸光值。計算 ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管需設(shè)一個對照管。

注意：如果 ΔA 大于 2，需要將樣本用試劑一稀釋，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)（若顯色 后出現(xiàn)分層現(xiàn)象，可改用蒸餾水稀釋）。

還原糖含量計算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為 y = 8.3796x- 0.3034；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

2、按樣本鮮重計算：

還原糖(μg/g 鮮重)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)

=238.67×(ΔA＋0.3034)÷W

3、按樣本蛋白濃度計算：

還原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)

=119.34×(ΔA＋0.3034)÷Cpr

4、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

還原糖(μg /10⁴ cell)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（1000×V1÷V2）

=0.239×(ΔA＋0.3034)

5、按血清（漿）體積計算：

還原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷[V3×V1÷(V2+V3）]

=1312.7×(ΔA＋0.3034)

1000 ：1mg/mL=1000μg/mL；V1 ：加入樣本體積，0.7mL；V2：加入提取液體積，2  mL； V3：加入血清（漿體積），0.2mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；1000： 細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，1000 萬。

注意：最低檢測限為 1mg/g 鮮重或 10μg/mg prot