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酸性木聚糖酶（ACX）測定試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-113

正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素 酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及 β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進(jìn) 有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng) 用于釀造和飼料工業(yè)中，ACX 一般分離自耐酸的真菌，細(xì)菌及部分霉菌。

測定原理

ACX 在酸性環(huán)境下能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，進(jìn)一步在沸水浴條件下與 3,5-二 硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在 540nm 處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在 540nm 吸光值增加速率，可計(jì)算 ACX 活力。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋，可見分光光度計(jì)、1 mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制

緩沖液：液體 90mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 12mL×1 瓶，4℃避光保存。（若出現(xiàn)白色絮狀或顆粒狀沉淀，可 60℃加熱溶 解后使用）。

試劑二：液體 18mL×1 瓶，4℃避光保存。

粗酶提取

1、發(fā)酵液：發(fā)酵液于 8000g ，4℃, 離心 15min，取上清，作為待測樣品。

2、酶干粉：稱約 0.1mg，加 1mL 緩沖液溶解待測。

3、組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1 ：5~10   的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 緩沖液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 8000g ，4℃,離心 10min，取上清待測。

測定操作表

ACX 計(jì)算公式

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 2.5554x - 0.002 ，R² = 0.9983

1、按液體體積活力計(jì)算：

酶活定義：50℃ , pH4.8 條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。

ACX 活力（nmol/min/mL）= (ΔA+0.002）÷2.5554÷150÷T×稀釋倍數(shù)×10⁶ 

= 435× (ΔA+0.002)

2、按蛋白濃度計(jì)算：

酶活定義：50℃ , pH4.8 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。

ACX 活力（nmol/min/mg prot）= (ΔA +0.002）÷2.5554÷150÷T×稀釋倍數(shù)×10⁶÷Cpr 

= 435×(ΔA +0.002 ) ÷Cpr

3、按鮮重計(jì)算：

酶活定義：50℃ , pH4.8 條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。

ACX 活力（nmol/min/g 鮮重）= (ΔA +0.002）÷2.5554÷150÷T×稀釋倍數(shù)×10⁶÷W 

= 435×(ΔA +0.002 ) ÷W

150：木糖的分子量；T：反應(yīng)時間，30min；稀釋倍數(shù)=V 反總÷V 樣=1000μL÷200μL=5；  10⁶ ：轉(zhuǎn)化因子，即 1mg/mL=10⁶ ng/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)

1、吸光度變化應(yīng)該控制在 0.01~0.8  之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計(jì)算公式中參 與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。

2、試劑盒 2-8℃保存，保質(zhì)期 3 個月，建議盡快使用。