伊人久久大香线焦|久久青青草国产第一页|亚洲国产九九九热视频|超乳视频爆乳无码免费专区|欧美日韩亚洲视频一区二区|少妇高潮惨叫喷水在线观看|亚洲区欧美区偷拍区中文字幕|国产日韩一区二区三区在线观看

堿性木聚糖酶（BAX）測定試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-114

正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及 β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進 有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng) 用于釀造和飼料工業(yè)中 ，BAX 一般分離自最適生長 pH 為 9 -11 的微生物。

測定原理

BAX 在堿性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與 3,5-二 硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在 540nm 處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還 原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在 540nm 吸光值增加速率，可計算 BAX 活力。

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋，可見分光光度計、1 mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制

緩沖液： 液體 65mL×1 瓶 ，4℃保存。

試劑一： 液體 10mL×1 瓶 ，4℃避光保存。（若出現(xiàn)白色絮狀或顆粒狀沉淀，可 60℃加熱溶 解后使用）。

試劑二： 液體 15mL×1 瓶 ，4℃避光保存。

粗酶提取

1、發(fā)酵液：發(fā)酵液于 8000g，4℃,離心 15min，取上清，作為待測樣品。

2、酶干粉：稱約 0.1mg，加 1mL 緩沖液溶解待測。

3、組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為  1： 5~10  的比例（建議稱取約  0.1g  組織，加入 1mL 緩沖液）進行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃,  離心 10min，取上清待測。

測定操作表

BAX 計算公式

標準曲線：y = 2.8432x - 0.0293 ，R²  = 0.9985 

1、按液體體積活力計算：

酶活定義：50℃ , pH9.0 條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX 活力（nmol/min/mL）= (ΔA+0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數(shù)×10⁶

= 391× (ΔA+0.0293)

2、按蛋白濃度計算：

酶活定義：50℃ , pH9.0 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX 活力（nmol/min/mg prot）= (ΔA +0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數(shù)×10⁶÷Cpr

= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr

3、按鮮重計算：

酶活定義：50℃ , pH9.0 條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX 活力（nmol/min/g 鮮重）= (ΔA +0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數(shù)×10⁶÷W

= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W

150：木糖的分子量； T：反應(yīng)時間，30min；稀釋倍數(shù)=V 反總÷V 樣=1000μL÷200μL=5；10⁶：轉(zhuǎn)化因子， 即 1mg/mL=10⁶ng/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項

1、吸光度變化應(yīng)該控制在 0.01~0.8  之間 ，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參 與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變；也可以延長或者縮短反應(yīng)時間。

2、試劑盒 2-8℃保存，保質(zhì)期 3 個月，建議盡快使用。