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β-葡萄糖醛酸苷酶（β-GD）試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-106

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

β-GD 廣泛存在于動物組織中，是一種參與腫瘤侵襲和轉移過程的基質降解酶，具有水解固醇葡萄糖 醛酸和酸性粘多糖等生理功能 。該酶在肝細胞中含量較高 。此外在胃癌組織中含量豐富，測定胃液β-GD  活性對于研究胃癌具有重要的意義。

測定原理：

β-GD 催化苯酚  β-D-葡萄糖醛酸產生游離的酚酞，通過測定苯酚含量反應該酶活性高低。

試劑的組成和配制

提取液：液體 60 mL×1 瓶，4℃保存； 

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶， -20℃保存；臨用前加入 5mL 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑仍 -20℃保存；

試劑三：液體 37.5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：1 μmol/mL 標準儲備液 10mL ，4℃保存； 

自備儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器 、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

樣品測定的前處理

按照組織質量（ g）：提取液體積(ml)為 1 ：5~ 10 的比例（建議稱取約 0. 1g 組織，加入 1ml 提取液）， 進行冰浴勻漿 。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 540nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定（在 EP 管中加入下列試劑）

混勻后，37℃水浴 30min

混勻，  540nm 下測定各管吸光值

注意：標準管和空白管只需測一次。

 β-GD 活性計算：

1、按樣本鮮重計算：

單位定義：每小時每 g 鮮重樣品中催化產生  1μmol 酚酞的量為一個活力單位。

β-GD ( μmol/h/g  鮮重）= (C 標準管×V1)×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標準管-A 空白管）÷(W×V1÷V2)÷T

=2×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標準管-A 空白管）÷W

2、按樣本蛋白濃度計算：

單位定義：每小時每mg 組織蛋白催化產生  1μmol 酚酞的量為一個活力單位。

β-GD ( μmol/h /mg prot）= (C 標準管×V1)×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標準管-A 空白管）÷(V1×Cpr)÷T

=2×（A 測定管-A 空白管）÷（A 標準管-A 空白管）÷Cpr

C 標準管：標準管濃度，  1μmol/ml；V1：加入樣本體積：0.05ml；V2：加入提取液體積， 1ml；T：反應 時間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。