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貨號(hào)：LE-1-244

正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體35mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加10mL雙蒸水充分溶解。（配好后3天內(nèi)使用完）

試劑三：液體5mL×1瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說明：

乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.15）是植物光呼吸代謝中的關(guān)鍵酶，也是光下合成草酸的關(guān)鍵酶，它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，對(duì)研究光呼吸代謝過程及其調(diào)控具有重要意義。

乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和鹽酸苯肼反應(yīng)生成乙醛酸苯腙，在324nm 有特征吸收峰。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1 mL石英比色皿。

酶液提取

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g， 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定操作

計(jì)算公式：

1、按照樣本蛋白濃度計(jì)算

酶活單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1 nmol 乙醇酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

GO活性（nmol/min /mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=392×ΔA÷Cpr

2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活單位定義：每克組織每分鐘氧化1 nmol 乙醇酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

GO（nmol/min /g）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T= 392×ΔA÷W

ε：乙醛酸苯腙毫摩爾消光系數(shù)：17L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積，1mL；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.05mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3min

注意事項(xiàng)：

1、測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高，請(qǐng)將樣品用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2、色素含量較高的樣品，可在提取酶時(shí)加活性炭吸附。