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維生素 E（VE）試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-280

正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

維生素 E（Vitamin E）是一種脂溶性維生素，其水解產(chǎn)物為生育酚，是生物體中最主要的抗 氧化劑之一，能阻止不飽和脂肪酸收到過氧化作用的損傷，維持不飽和脂肪酸細(xì)胞膜的完整 性和正常功能，具有延緩衰老、預(yù)防溶血性貧血作用，在醫(yī)藥、化妝品、保健品、食品行業(yè) 具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

測定原理

VE 還原 Fe3+為 Fe2+ ，Fe2+與 1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物，在 530nm 有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、 1 mL 玻璃比色皿、漩渦震蕩儀。

試劑組成和配制

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5mL×1 瓶 ，4℃避光保存。

試劑二： 液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。

樣本處理

1、組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1 ：5~10 的比例（建議稱取約 0.2g，加入 1mL 提取液）加入提取液，充分勻漿后用提取液定至 2mL ，在漩渦混勻儀上震蕩 5min，于 25℃ ,  5000g 離心 10min，取上層測定。

2、細(xì)胞： 按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）： 提取液體積（mL）為 500~1000： 1  的比例（建議 1000 萬細(xì)胞加入 2mL 提取液）， 冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒， 總時(shí)間 3min）； 在漩渦混勻儀上震蕩 5min，于 25℃,  5000g 離心 10min，取上層測定。

3、血清：取 0.2mL，加 1.9mL 提取液，漩渦儀混勻上震蕩 5min，于 25℃, 5000g 離心 10min， 取上層測定。

 測定操作

計(jì)算公式

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.022x + 0.0065 ， R²  = 0.9978

1、按照蛋白含量計(jì)算

VE 含量(μg/mg prot）= (△A -0.0065）÷ 0.022×V 反總÷（V 樣×Cpr）

= 181.8× (△A -0.0065）÷ Cpr

2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算

VE 含量（μg/g）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）

= 181.8×（△A -0.0065）÷ W

3、按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

VE 含量(μg/10⁴ cell）= (△A -0.0065）÷ 0.022×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）

= 181.8×(△A -0.0065）÷ 細(xì)胞數(shù)量

4、按照液體體積計(jì)算

VE 含量(μg/mL）=  (△A -0.0065）÷ 0.022×V 反總÷V 樣×20

= 1818× (△A -0.0065）

V 反總：反應(yīng)總體積，1mL；：V 樣：加入樣本體積，0.5mL；V 樣總：加入提取液體積，2mL； Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)

1、若反應(yīng)體系產(chǎn)生沉淀，需要將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，并在?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2、最低檢出限為 29.5 μg/g。