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甜菜堿含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)（分光光度法）

貨號(hào)：LE-1-378

正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

甜菜堿是一種廣泛分布于動(dòng)植物及微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿，是生物體內(nèi)膽堿的氧 化產(chǎn)物，可以增強(qiáng)免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進(jìn)動(dòng)物蛋 白質(zhì)和脂肪代謝、增進(jìn)食欲、緩和應(yīng)激、調(diào)節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用，在化工、 醫(yī)藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用。

測(cè)定原理

甜菜堿在強(qiáng)酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在 525nm 處有特征吸收峰，測(cè)定 525nm 處的吸光值，可計(jì)算得樣品的甜菜堿含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿、乙醚、鹽酸、丙酮和蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體 30mL×1 瓶 ，4℃保存；

試劑一：粉劑 3 瓶，4℃保存，臨用前根據(jù)用量配制，每瓶加 40mL 蒸餾水溶解，加 780μL 濃鹽酸調(diào) pH 為 1。

試劑二：99%乙醚，自備。取無(wú)水乙醚 99mL，加入蒸餾水 1mL，混勻。

試劑三：70%丙酮， 自備。（易揮發(fā)，根據(jù)用量自備，丙酮：蒸餾水=7:3）。

甜菜堿提取

取烘干后過(guò) 40  目篩的樣品約 0.04g，加 1.6mL 水，置于 60℃提取 30min，期間不斷震蕩。 再加入 400μL 提取液，混勻后 10000g ，25℃,離心 10min，取上清液。

測(cè)定操作表

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 525nm。

2、操作表

甜菜堿含量計(jì)算公式

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 1.004x + 0.0057，R² = 0.9993；x 為甜菜堿濃度（mg/mL）， y 為吸光值。

甜菜堿含量（mg/g 干重）= (ΔA-0.0057）÷ 1.004× V 標(biāo)準(zhǔn)÷(V 樣÷V 樣總×W) 

= 1.99×(ΔA-0.0057）÷W

V 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品體積，1.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，1.2mL；V 樣總：加入提取液體積，2mL；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)

1、試劑一配制時(shí) pH 嚴(yán)格控制為 1，否則會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)不完全，配制后 4℃只能穩(wěn)定幾個(gè)小時(shí)，配制后盡快使用。

2、試劑二與試劑三對(duì)呼吸道有一定的刺激，請(qǐng)做好防護(hù)工作。