產(chǎn)品名稱：單胺氧化酶(MAO)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣,100管/96樣
產(chǎn)品貨號：LE-1-384,LE-2-384
產(chǎn)品報價：
免費咨詢：0551-66107970
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
檢測方法 |
規(guī)格 |
售價（元） |
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LE-1-384 |
單胺氧化酶(MAO)測試盒 |
分光光度法 |
50管/48樣 |
350 |
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LE-2-384 |
單胺氧化酶(MAO)測試盒 |
微量法 |
100管/96樣 |
690 |
貨號：LE-1-384
正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動物的各種器官，特別是分泌腺、腦、肝臟，在無脊椎動物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝，含量較低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纖維化的程度。此外，MAO活性異常導(dǎo)致細胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運轉(zhuǎn)出現(xiàn)紊亂， 從而引發(fā)多種病癥。
測定原理：
MAO催化產(chǎn)生H2O2，過氧化物酶在有氧存在時催化H2O2分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì)，顏色深淺與單胺氧化酶活性成線性關(guān)系。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
提取液二：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體 1mL×1 支，4℃保存；
粗酶液提?。?/strong>
1. 稱取約0.1g樣品，加1mL預(yù)冷的提取液一充分冰浴勻漿，1000g，4℃，離心10min，棄沉淀； 把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1mL預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預(yù)冷的1mL生理鹽水或PBS，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定）。
2. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500 萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g， 4℃，離心30min，棄上清；加入1.0mL預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min， 棄上清；沉淀加入預(yù)冷的1.0 mL生理鹽水或PBS，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定），取上清置于冰上待測。
3. 血清：直接測定。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至500nm，蒸餾水調(diào)零。
2、MAO 檢測工作液的配制：用時將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中，充分混勻，待用；用不完的試劑4℃可保存一周；
3、測定前將MAO檢測工作液在37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴10min以上。
4、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和240μL工作液，立即混勻并計時，記錄500nm下20s吸光值A(chǔ)1和1min20s后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA＝A2-A1。
MAO 活力單位的計算
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）MAO 活力的計算
單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個酶活力單位。
MAO（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=3333×ΔA
2、動物組織 MAO 活力的計算
（1）按蛋白濃度計算
單位定義 ：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個酶活力單位。
MAO（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr)÷T=3333×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個酶活力單位。
MAO（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T
=3333×ΔA÷W
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2.5×10-4 L；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺摩爾消光系數(shù)，7.5×103 L/mol/cm； d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T： 反應(yīng)時間，1min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
用96孔板測定的計算公式如下1、血清（漿）MAO 活力的計算
單位定義 ：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個酶活力單位。
MAO（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=6666×ΔA
2、動物組織 MAO 活力的計算
（1）按蛋白濃度計算
單位定義 ：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個酶活力單位。
MAO（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr)÷T=6666×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個酶活力單位。
MAO（nmol/min/ g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T=6666×ΔA÷W
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2.5×10-4 L；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺摩爾消光系數(shù)，7.5×103 L/mol/cm； d：96孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.01mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，1min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項：
1、吸光度變化應(yīng)該控制在 0.01～0.8 之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。
2、樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定。
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