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土壤羥胺還原酶（hydroxylamine reductase,HR）試劑盒說明書(可見分光光度法)

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 15 mL 蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 30mL×1 瓶，4℃保存。

試劑五：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。

試劑六：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑七：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

標準品：粉劑×1 支，4℃保存。臨用前加入 1.028mL 蒸餾水，配成 140μmol/mL 的鹽酸羥胺標準品。

產(chǎn)品說明：

土壤羥胺還原酶能將土壤中氮代謝過程中形成的中間產(chǎn)物羥胺還原為氨，土壤中的還原態(tài)化合物可作為氫的供體，其強弱影響到土壤氮代謝過程中氮素的氨揮發(fā)損失，間接影響氮肥的利用效率。

硫酸鐵銨中的 Fe³⁺可將羥胺氧化為氮氣，自身被還原為 Fe²⁺，Fe²⁺在弱酸條件下與鄰菲羅琳形成橙紅色配合物，在 510nm 處有吸收峰，羥胺還原酶作用于羥胺，使配合物形成量減少，510nm 處吸光值的減少可反映羥胺還原酶的活性。

試驗中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計、天平、臺式離心機、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、30-50 目篩、漩渦震蕩儀、氮吹儀、EP 管、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品處理：

新鮮土樣自然風干或 37℃烘箱烘干，過 30-50 目篩。

二、測定步驟：

1、 分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 510nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 將 140μmol/mL 標準液用蒸餾水倍比稀釋為 4.375、2.1875、1.094、0.547、0.2735、0.13675μmol/mL的標準溶液備用。

3、 操作表：(在 1.5mL 離心管中依次加入下列試劑)

三、土壤羥胺還原酶活性計算：

1、 標準曲線的繪制：

以各個標準溶液的濃度為 x 軸，其對應的△A 標準為 y 軸，繪制標準曲線，得到標準方程 y=kx+b， 將△A 帶入方程得到 x（μmol/mL）

2、 土壤羥胺還原酶活性的計算：

酶活定義：每克土壤每天轉(zhuǎn)化 1μmol 羥胺為 1 個酶活力單位。

S-HR 活性（U/g 土樣）=x×V 試劑一÷W÷T=4.8x÷W。

V 試劑一：加入試劑一體積，0.2mL； W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時間 1/24h。

注意事項：

1、土壤表層溶解氧濃度較大，取樣應取表層 5cm 以下的土壤，否則酶活性較低或者測定不到。

2、試劑三盡量不要敞口放置，取完立即加蓋擰緊。若長期敞口放置，可以沸水浴 10min（蓋蓋兒） 冷卻至常溫使用。

3、當△A 大于 0.8 時，建議將樣本上清液稀釋后再進行測定。

4、反應體系最好能用氮吹儀排除溶解氧，若無此裝置，則加入試劑三后立即密封，于 30℃反應 1h。