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土壤幾丁質(zhì)酶活性檢測試劑盒說明書（可見分光光度法）
產(chǎn)品內(nèi)容：

緩沖液：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 25mL×1 瓶，4℃保存，使用前搖勻。

試劑二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。 

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 瓶。5mg N-乙酰氨基葡萄糖，4℃保存。臨用前加入 2.27mL 蒸餾水配成10μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

產(chǎn)品說明：

幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細(xì)胞壁中，而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。

幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，進(jìn)一步與 3,5-二硝基水楊酸產(chǎn)生棕紅色化合物， 在 540nm 處有特征吸收峰，吸收值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。

需自備的儀器和用品：

天平、水浴鍋、離心機(jī)、震蕩儀、可見分光光度計(jì)、玻璃比色皿，甲苯、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品處理

新鮮土樣風(fēng)干，過 40 目篩。

二、測定操作表

1、可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min。波長調(diào)至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、將標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋為 5、4、3、2、1μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3、在 EP 管中分別加入：

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：以濃度（y） 為縱坐標(biāo)，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)（x）為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

以ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為 x 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b。將ΔA 測定帶入標(biāo)準(zhǔn)方程中，得到 x（μmol/mL）

酶活性定義：37℃條件下，每克土壤每天分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1μmol N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。

幾丁質(zhì)酶活力（U /g 土樣）＝ y×V 反總÷W÷T =15.6×y÷W

T：反應(yīng)時(shí)間，1/24d； V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.65mL；W：樣品質(zhì)量，0.1g。