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酸性土壤速效磷測試盒說明書（可見分光光度法）

產(chǎn)品簡介：

速效磷是土壤中可被植物吸收的磷組分，包括全部水溶性磷、部分吸附態(tài)磷、易礦化有機(jī)態(tài)磷以及某些已溶解的沉淀態(tài)磷酸鹽，土壤中速效磷是限制植物生長主要因子之一。

用雙酸法提取酸溶性磷和吸附態(tài)磷，鉬藍(lán)與磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物質(zhì)，通過測定660nm 光吸收，即可計(jì)算磷含量。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計(jì)、天平、臺式離心機(jī)、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、20 目篩、漩渦震蕩儀、EP 管。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 80mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 15mL 雙蒸水，溶解后 4℃保存一周。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 15mL 雙蒸水，溶解后 4℃保存一周。

試劑三：液體 15mL×1 瓶，室溫保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：10μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 1mL×1 支，4℃保存。

工作液（定磷劑）的配制：按 H₂O：試劑一：試劑二：試劑三=2:1:1:1 的比例配制，配好的工作液應(yīng)為淺黃色。若變色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，工作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

操作步驟：

一、樣本處理：

新鮮土樣風(fēng)干，過 20 目篩，按照土壤質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：10-20 的比例（建議稱取約 0.05g 土樣，加入 1mL 提取液），振蕩提取 1h，10000g，25℃離心 10min，取上清液待測。  

二、測定步驟：

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 660nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 將 10μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用提取液稀釋為 2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3、 操作表：(在 1.5ml 離心管中依次加入下列試劑)

三、速效磷含量計(jì)算：

1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸，其對應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b， 將△A 帶入方程得到 x（μmol/mL）。

2、 速效磷含量的計(jì)算：

速效磷含量（μmol /g 鮮重）=x×V 樣÷（V 樣×W÷V 樣總）=x÷W。

V 樣：加入樣本體積，0.1mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)

1、 工作液（定磷劑）應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，正常顏色為淺黃色，如有變色或變藍(lán)則均為失效。

2、 此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對測定所用試管或 EP 管等試驗(yàn)器材均要求嚴(yán)格無磷。

3、 顯色結(jié)束后應(yīng)立即檢測。

4、 當(dāng)△A 大于 1 時(shí)，建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測定。