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貨號：LE-1-363

正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

ACP  在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機磷酸，常見于巨噬細胞的溶酶體內(nèi)。ACP 常用于前列腺癌的輔助診斷。

測定原理：

在酸性環(huán)境中，ACP 催化對硝基苯磷酸二鈉水解生成 4-硝基苯酚，在 405nm 有特征光吸收；通過測定 405nm 吸光度增加速率，來計算 ACP 活性。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL  玻璃比色皿、冰、可 調(diào)式移液器和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1 ：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 試劑一）進行冰浴勻漿，4℃ 、10000g 離心 10min ，取上清液待測。

2、細菌或細胞：按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴ 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000 ：1  的比 例（建議 500 萬細胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒， 間隔 7 秒，總時間3min）；然后 10000g ，4℃,離心 10min ，取上清置于冰上待測。

3、血液可直接測定，或者適當稀釋后測定。

測定：

1、分光光度計預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 405 nm。

2、在 EP  管中加入下列試劑

混勻，吸取 1 mL  加入玻璃比色皿中，405 nm  下測定各管吸光值。ΔA=A 測定管-A 對照管。

注意：每個測定管需做一個對照管。

ACP 活性計算：

標準曲線 y = 14.6672x + 0.0179；R² = 0.9996；x 為標準品濃度(μmol/mL），y 為吸光值 ΔA。

1、血液中 ACP 活性計算

活性單位定義：30℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚定義為 1 個酶活單位。

ACP 活力(μmol/min/mL)=  (ΔA-0.0179）÷14.6672 ×V 反總÷T÷V 樣 

= 0.2273×(ΔA-0.0179）

2、組織、細菌或細胞中 ACP 活性計算

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：30℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 μmol 4-硝基苯酚定義為 1 個酶活單位。 

ACP 活力(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0179)÷14.6672×V 反總÷T÷(V 樣×Cpr)

=0.2273×(ΔA-0.0179）÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：30℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 μ mol 4-硝基苯酚定義為 1 個酶活單位。

ACP 活力 (μmol/min/g  鮮重)=(ΔA-0.0179)÷14.6672×V 反總÷T÷(W×V 樣÷V 樣總)

= 0.2273×(ΔA-0.0179）÷W

（3）按照細菌或細胞數(shù)量計算

活性單位定義：30℃中每 10⁴ 個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生 1 μ mol 4-硝基苯酚定義為 1 個 酶活單位。

ACP 活力 (μmol/min/10⁴ cell)=(ΔA-0.0179)÷14.6672 ×V 反總÷T ÷（細胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總） 

= 0.2273×(ΔA-0.0179）÷細胞數(shù)量

V 反總：反應(yīng)體系總體積（mL），1 mL； W  ：樣品質(zhì)量，g； V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本 體積（mL），0.01 mL；V 樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間（min），30 min；500： 細胞或細菌總數(shù)，500 萬。

注意事項：

ACP 不穩(wěn)定，尤其在 37℃和 pH 大于 7 的條件下活力喪失快，因此酸性磷酸酶樣品一般需當天準備；血清樣品中，每毫升血清中加入 10mg 檸檬酸氫二鈉或者 5mg 硫酸氫鈉，使 pH 降至 6.5 以下，或 5ml 血清加入 30%醋酸溶液2～3滴，置于 4℃可保存 1 周。